(―)测定蛇毒
1.蛇伤免疫诊断用已知的种特异性蛇毒抗体结合的血细胞或天然胶乳进行反相凝 集试验,或用已知蛇毒结合的血细胞或天然胶乳(或聚苯乙酰)和已知蛇毒种特异性抗体 进行凝集抑制试验测定标本中的蛇毒,可进行蛇伤诊断。也可用固相夹心法(RIA)、免疫 放射测定法、双抗体夹心法(ELISA)、竟手法、间接混合夹心法和酶免疫放大测定法等测 定蛇毒,进行蛇伤的诊断(包括法医学鉴定蛇毒和蛇伤致死案件。这部分可参见蛇伤的免 疫学诊断)。
2.蛇伤中毒剂量的测定可用上述的RIA和ELISA测定蛇伤病人血中蛇毒的含 量,从而确定蛇伤中毒程度。也可以用上法测定蛇毒在局部的吸收、扩散、各组织器官的分 布和排泄情况的动力学以及对某些发病机制的研究。1977年Reid和Theakston用 ELISA在北尼日利亚和加纳对蛇伤病人体内蛇毒含量进行了测定。他们发现在彩锯鱗蝰蛇毒中毒时,咬伤后6h〜34h的血清中,蛇毒仍为阳性。在未给抗蛇毒血清
时,血清中的彩锯鳞蝰蛇毒在咬伤后27h上升到较大,并且这时尿中也显示出蛇毒存在。 咬伤2天后,血清和尿中蛇毒的水平几乎降到零,但血液不凝仍持续存在。这提示了仅微 量的彩锯鱗蝰蛇毒即可引起人体完全性的脱纤维蛋白。在这种情况下,凝血试验比 ELISA更为敏感。彩锯鱗蝰蛇毒的吸收比较慢,因此在中等度中毒时,将有充分时间应用 抗蛇毒血清。他们用ELISA确认了蛇毒是从肾脏排出。给予抗蛇毒血清治疗后,出凝血时 间常恢复正常。另外发现血泡液和尿液中蛇毒存在的时间比在血清中还长,前者在2天后 仍常被检出。一个咬伤后34h出现蛛网膜下腔出血的病人,应用蝰蛇抗蛇毒血清后,出血 和凝血恢复正常。但是脑脊液和尿在咬伤后48h仍保持彩锯鱗蝰蛇毒的强阳性。这个发 现提示了在蝰蛇咬伤中毒时,咬伤局部的肿胀和血泡形成实际上是一个毒素仓库,进入这 个仓库的抗蛇毒血清的量很少,而且毒素将持续从这里释放引起迟发性中毒作用,甚至致 命的出血。
对血中蛇毒的定量测定也可以检查抗蛇毒血清和治疗蛇伤的中草药等在体内的治疗 效果。
3.蛇毒抗原结构的分析免疫双扩散、各种免疫电泳、ELISA和RIA可以进行蛇毒 的共同抗原和特异性抗原成分的分析研究。1981年Coulter等应用ELISA结合RIA检 测了 7种澳大利亚蛇毒、4种眼镜蛇毒之间的抗原关系。发现4种眼镜蛇毒仅同一种或少 数几种澳大利亚蛇毒素之间发生微弱的反应,而眼镜蛇毒同大多数实验的抗蛇毒血清发 生强列的交叉反应。这个分析方法对于在无相应抗蛇毒血清的情况下,寻找代替的有效抗 蛇毒血清治疗有实用意义。
4.代替小白鼠中和试验和评价治疗用的市售抗蛇毒血清的效力1979年Therkston 和Reid用ELISA体外测定ED5。,同小鼠体内ED5。进行评估。38批不同的试验抗蛇毒血 清的ELISA ED5。与小鼠体内的ED5。进行比较,得到非常好的相关关系,说明ELISA可 以代替动物中和试验。它在方法上也节省蛇毒的用量,经济、快速、简单,可以作为抗蛇毒 血清效价的初筛方法。
(二) 测定蛇毒抗体
流行病学调查1979年开始,Pugh等应用ELISA结合详细的农村调查方法证实
了尼日利亚北方人口较密集的大草原区域蛇伤的发病率每年是48/100 000,死亡率为
1%,主要的蛇种是黑颈眼镜蛇;而在很少开发的Be-nue流域,较远的南方每年的蛇伤 发病率大约是497/100 000,死亡率为12. 2%。对537份有蛇伤史的标本进行特异性抗体 的分析,有210例(40%)检出阳性抗体,其中65%是彩锯鱗蝰蛇毒抗体,13%是咝蝰蛇毒抗体,11 %是响尾蛇蛇毒抗体,8%是黑颈眼镜蛇毒抗体,3%是埃及眼镜蛇蛇毒抗体。
追溯诊断利用ELISA检查蛇伤患者血清中的蛇毒抗体,可以进行蛇伤的追溯诊断。
单克隆抗体的测定常用ELISA测定杂交瘤细胞产生的单克隆抗体,用免疫“印 溃”技术筛选McAb。
(三) 免疫组织化学方面
荧光抗体法、酶免疫定位技术可以进行组织或细胞内的蛇毒、蛇毒抗体的定位研究。